关键词 罗布麻；自由基；红细胞膜；脂质过氧化
中图号R285 文章编号：1006～8783(2004)05—0506—03 文献标识码：A
细胞膜具有维持细胞完整性和功能的作用。因其富含饱和脂肪酸最易受自由基攻击，自由基对细胞膜的损伤主要是产生脂质过氧化反应，从而引起膜结构和功能的改变。因此，抗氧化剂可有效地防止自由基对细胞膜脂质的过氧化损伤。罗布麻属于夹竹桃科植物(Apocynum vene—turn)，又名红麻，是生长在盐硷沙荒地区的野生植物，我国罗布麻的资源非常丰富，分布范围小，用罗布麻作茶饮及药用有悠久的历史。现代研究认为其可预防和治疗老年高血压、感冒、气管炎，对增强机体抗病能力均有一定的作用。罗布麻提取物的主要成分为黄酮类化合物0 ，而黄酮类化合物由于含有还原性酚羟基，可直接清除氧自由基，抑制脂质过氧化。本文观察了罗布麻提取物对体外黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶、过氧化氢(H O )和uV照射等三种自由
基产生体系诱导细胞膜脂质过氧化的影响，报道如下
1 仪器与材料
1．1 药物与试剂 罗布麻叶购自武汉市药材公司，经鉴定为Folium apocyni Veneti。黄嘌呤(Xan)和黄嘌呤氧化酶(XO)为Sigma公司产品，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒和丙二醛(MDA)测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所，其他试剂均为国产分析纯。
1．2 动物大白兔购于华中科技大学同济医学院动物实验室
1．3 仪器 uV一2201紫外分光光度计(日本岛津)、高速冷冻离心机(Sigma公司)
1．4 实验药物的制备 罗布麻叶100 g，用 ：70％ 乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，回收溶剂后，得到浸膏20．9 g。取该浸膏，用蒸馏水配成浓度分别为0．1、O．2、0．4、0．8 mg／mL的溶液，经0．2 Ixm微孔滤膜过滤，4℃保存备用。
2 方法与结果
2．1 方法
2．1．1 红细胞膜的制备兔全血在0～4 oC用低渗溶血法 制备，膜蛋白含量用考马斯亮蓝试剂盒测定，得膜蛋白浓度0．098 g／L 4 J。
2．1．2 Xan—XO体系诱导细胞膜脂质过氧化各取细胞膜悬液(0．098 g／L)o．5 mL，分别加待测药物0．I mL(对照加pH 7．8磷酸盐缓冲液)，置37℃水浴15 rain，再加1．0 mmol／L Xan溶液0．3 mL，0．4U／mL XO 0．1 mL，立即将反应管置37 cc水浴1 h待测。
2．1．3 H 0 诱导细胞膜脂质过氧化 以2 mol／LH 0 (终浓度为18 mmol／L)代替Xan—XO，用pH7．8磷酸盐缓冲液补充反应体系的体积至1．0mL，其余条件同“2．1．2”项。
2．1．4 uV照射诱导细胞膜脂质过氧化 反应终体积为1 mL，内含细胞膜0．5 mL及不同浓度的药物或等体积的磷酸盐缓冲液，反应管置紫外灯下照射1 h后待测。
2．1．5 脂质过氧化物的检测采用MDA试剂盒测定，测定过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)含量以反映脂质过氧化程度。以下式计算罗布麻对反应体系诱导MDA生成的抑制率：抑制率=籍x 100对照组 MDA 含量一正常组 MDA 含量 ％
2．1．6 统计学处理MDA数值采用S的形式，多组资料间的两两比较用t检验，P<0．05认为有显著性差异。
2．2 结果
2．2．1 罗布麻醇提物对Xan—XO体系诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响 结果表明，Xan—XO系统可诱导细胞膜发生脂质过氧化反应，使对照组的MDA含量明显升高(P<0．001)；四个罗布麻组的MDA值较对照组均有显著下降，并有一定的剂量依赖关系(P<0．001，P<0．01)。见表1。
2．2．2 罗布麻醇提物对H 0 诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响结果表明，H 0 可诱导细胞膜脂质过氧化反应，使对照组的MDA含量明显升高(P<0．001)；四个罗布麻组的MDA值较对照组均有显著下降，并有一定的剂量依赖关系(P<0．001，P<0．01)。见表2。
2．2．3 罗布麻醇提物对uV照射诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响 结果表明，uV照射可诱导细胞膜脂质过氧化反应，使对照组的MDA含量明显升高(P<0．001)；四个罗布麻组的MDA值较对照组均有显著下降，并有一定的剂量依赖关系(P<0．01)。见表3
3 讨论
3．1 自由基学说认为，自由基产生于细胞和组织的氧化代谢反应过程中，自由基的不可逆累积可导致诸多损害，引发许多病变，其中一个重要危害主要表现在活性氧自由基能攻击生物膜上的多不饱和脂肪(PUFA)，引发膜脂质过氧化链式反应(chainreaction)，导致自由基的扩增和膜脂质过氧化(LPO)加深，过氧化脂质(LPO)经过氧化物酶分解，生成丙二醛(MDA)，MDA与蛋白质、肽类或脂类聚合、交联形成脂褐质，从而引起膜结构和功能的改变。因此，抗氧化剂可能有效地防止自由基对细胞膜脂质的过氧化损伤。
3．2 本实验为了观察罗布麻醇提物抗细胞膜脂质过氧化的作用，采用了三种损伤体系 ]，分别通过不同的机制产生自由基。在Xan—XO系统种，Xan在XO的催化下产生了超氧阴离子自由基(O 。：Xan+20 +H O尿酸
+O 一+2H ，近年有学者应用电子顺磁共振(ERS)技术检测到该体系有O， 生成。H O 与O2。一样，也是组织氧化代谢的异常产物，当组织中H，O 增多时，通过Fenton反应，与组织中微量的Fe 作用生成毒性更大的羟自由基(·OH)。紫外线照射可使细胞膜悬液中的H 0 、0 和其他生物分子中的电子从低能轨道跃迁到高能轨道，称为激发态分子，后者迅速分解成·OH、0， 和生物分子自由基。这些外源性自由基可引起细胞膜脂质过氧化，生成的过氧化脂质能与含游离氨基酸的蛋白质及核酸等生物大分子形成Schif碱，从而使生物分子之间发生交联，蛋白质变性，造成膜功能的损伤。
3．3 罗布麻醇提物可显著抑制这三种自由基体系诱发的红细胞膜MDA生成，提示该药通过阻断自由基形成或直接清除自由基来减轻脂质过氧化反应，这一作用可能与其分子中含有游离酚羟基有关。已知黄酮类化合物，由于含有酚羟基，在细胞膜发生脂质过氧化反应时，本身可脱氢氧化，提供电子给自由基，从而有效地中止自由基的连锁反应_6]